بعض الأسئلة والإجابات حول قابلية ذوبان الببتيدات المعدلة

1. ما هي الشوائب الموجودة في تلك غير المنظورة من غير HPLC؟

ج: شوائب الببتيد المعدلة والببتيد غير المعدلة في الببتيد الخام المعدل: مثل الببتيد المعدل غير المليء وبعض المواد الخام مثل DTT ، TFA ، إلخ.

2. ما هي الشوائب التي يتم تنقيتها بواسطة HPLC؟

ج: لا يزال لدى الببتيد المعدل الذي تم تنقيته بواسطة HPLC الكثير من الشوائب ، وعادة ما تكون الشوائب ببتيدات قصيرة وقليل من TFA.

3. ما هي المدة المناسبة؟

ج: يجب أن ينظر تخليق الببتيد المعدل في طول الببتيد المعدل ، الشحن ، الماء ، الكارهة للماء وعوامل أخرى. كلما طالت الطول الإجمالي ، كلما انخفض نقاء وعائد المنتج الخام ، وارتفاع صعوبة التنقية واحتمال الصعوبة في التوليف. ومع ذلك ، لا توجد وسيلة لتغيير تسلسل المجال الوظيفي للببتيد المعدل ، ولكن من أجل إكمال توليف الببتيد المعدل ، في بعض الأحيان يمكن إضافة بعض الأحماض الأمينية المساعدة فقط في المنبع والبؤس المنبع من المجال الوظيفي لتحسين قابلية الذوبان والببتيد المعدل. إذا كان الببتيد المعدل قصيرًا جدًا ، فقد تكون هناك مشاكل في التوليف. المشكلة الأولى هي أن الببتيد المعدل المصنوع لديه بعض الصعوبات في عملية ما بعد المعالجة. عادةً ما يكون للببتيد المعدل داخل 5 الببتيدات أحماض أمينية مسعور ، وإلا فإن ما بعد المعالجة أمر صعب. يمكن الحصول على الببتيدات المعدلة التي تقل عن 15 بقايا الأحماض الأمينية بعائد وعائد مرضي.

بعض الأسئلة والإجابات حول قابلية ذوبان الببتيدات المعدلة

4. كيف تحكم على قابلية ذوبان الببتيد المعدلة من التسلسل؟

(1) الببتيد المعدل الذي يحتوي على نسبة عالية من الأحماض الأمينية مسعور مثل LEU و VAL و IIE و MET و PHE و TRP غير قابلة للذوبان بسهولة في محلول مائي أو غير قابل للذوبان تقريبًا. يمكن أن يكون هذا الحمض الأميني مشكلة إما في التنقية أو التوليف.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. لماذا يصعب تجميع Cys أو Met أو TRP؟

ج: لا يمكن تصنيع الببتيدات المعدلة التي تحتوي على Cys أو Met أو TRP ، ومن الصعب الحصول على منتجات نقاء عالية. ويرجع ذلك أساسًا إلى حقيقة أن هذه المجموعات أقل استقرارًا وعرضة للأكسدة. يتطلب استخدام وتخزين هذه الببتيدات المعدلة رعاية خاصة لمنع فتح الغطاء المتكرر.

6 ، لماذا سيكون بعض العائد الاصطناعي أو النقاء منخفضًا جدًا؟

ج: هناك فرق كبير بين تخليق الببتيدات المعدلة وتوليف الاشعال. هناك عدد قليل جدًا من الاشعال التي لا يمكن توليفها ، ولكن غالبًا ما تكون هناك ببتيدات معدلة لا يمكن تصنيعها. مثل Val و Ile و Tyr و Trp و Leu و PHE و GLN و Thr Thr Amin Acid بالقرب من أو حلقة ، لا يمكن أن يمتد الببتيدات المعدلة في عملية التوليف ، وكفاءة الاصطناعية أقل. كفاءة التوليف ونقاء المنتج منخفضة للغاية في الحالات التالية ، مثل: تكرار Pro ، Ser-ser ، كرر ASP ، أربعة gly متتالية ، إلخ.

7. كيف يتم تنقيتها؟

ج: يتم تنقية الببتيدات المعدلة عمومًا بواسطة عمود المرحلة العكسية (مثل C8 ، C18 ، وما إلى ذلك) عند 214nm. نظام المخزن المؤقت هو عمومًا حلًا يحتوي على TFA ، PH2.0. احتوى Buffera على 0.1 ٪ TFainddh2o ، وكان Bufferb يحتوي على 1 ٪ TFA/ACN/PH2.0. تم حلها في بوفيرا قبل التنقية. إذا لم يكن المحلول مرضيًا ، فأذوب مع Bufferb ، ثم قم بتخفيفه باستخدام Buffera ؛ للببتيدات المعدلة عالية الكارهة للماء ، في بعض الأحيان يضاف القليل من حمض الخليك أو حمض الخليك.