مقدمة موجزة لتقنية وضع العلامات الفسفورية

يلعب تعديل الفسفرة دورًا مهمًا في حياة الخلايا ويؤثر على جوانب متعددة. يرتبط الفسفرة من البروتينات ارتباطًا وثيقًا بعمليات بيولوجية مختلفة ، مثل إصلاح أضرار الحمض النووي ، وتنظيم النسخ ، ونقل الإشارة ، وتنظيم موت الخلايا المبرمج. يساعد دراسة البروتينات الفسفورية والببتيدات على الكشف عن آليات هذه العمليات وتعميق فهمنا لجوهر أنشطة الحياة. هونغ ببتيد التكنولوجيا الحيوية تمتلك تقنية وضع العلامات على الفسفرة الناضجة. الاستفادة من مزايا المواد التكنولوجية والخام الخاصة بها ، يمكننا تصنيع الببتيدات التي تحتوي على سيرين الفسفرة (PSER) ، ثريونين الفسفرة (PTHR) ، والتيروزين الفسفوري (PTYR) ، وتوفر الببتيدات عالية الجودة مع واحد إلى خمسة مواقع فسفورية. 

نظرة عامة على تكنولوجيا علامات الفسفرة: 

تشير الببتيدات الفسفورية بشكل رئيسي إلى مجموعات هيدروكسيل السلسلة الجانبية من سيرين (SER) ، التيروزين (TYR) ، وبقايا ثريونين (THR) في سلسلة الببتيد التي يتم تعديلها في استرات الفوسفات الحمضية. تلعب الببتيدات الفسفورية دورًا مهمًا في دراسة الفسفرة البروتينية. لذلك ، من المهم بشكل خاص استكشاف تفاعلات الفسفرة للبروتينات والببتيدات وإيجاد طرق اصطناعية ناضجة وبسيطة. 

في الوقت الحاضر ، تقع طرق تعديل الفسفرة للببتيدات بشكل أساسي في فئتين: 

(1) دمج مباشرة الأحماض الأمينية الفسفورية المحمية بشكل مناسب في تسلسل الببتيد: 

أولاً ، تتعرض الأحماض الأمينية التي تحتاج إلى فسفرة (مثل THR أو SER أو TYR) لعلاج الفسفرة ومحمية بشكل مناسب. بعد ذلك ، بعد عملية توليف الببتيد الصلبة التقليدية (SPPS) ، ترتبط المونومرات الفسفورية بالمواقع المحددة للببتيد. هذه الطريقة بسيطة للعمل وأصبحت واحدة من التقنيات الرئيسية لتعديل الفسفرة النقطة للببتيدات. 

(2) بعد توليف تسلسل الببتيد على الراتنج ، يتم فسفرة السلسلة الجانبية من Ser أو Tyr أو Thr: 

عند إجراء تعديل الفسفرة ، إذا تم اعتماد طريقة تكثيف المونومرات الفسفورية مباشرة في بولي ببتيد ، فإن الأحماض الأمينية الفسفورية ، بسبب سلسلة الجانبية الأكبر ، تسبب زيادة في العائق الفائق ، مما يجعل التكثيف مع سلسلة الببتيد صعبة. علاوة على ذلك ، سيصبح إدخال الأحماض الأمينية اللاحقة أيضًا معقدًا نسبيًا ، خاصةً عندما يكون هناك العديد من مواقع الفسفرة. ستكون عملية التوليف صعبة للغاية ، وسيكون المنتج النهائي معقدًا للغاية ، مما يجعل الانفصال صعبًا والعائد منخفض للغاية. لذلك ، عندما يكون هناك العديد من المواقع التي تتطلب الفسفرة في سلسلة الببتيد ، يمكن اعتبارها لإكمال توليف تسلسل الببتيد على الراتنج أولاً ، ثم فسفوريلات مجموعات هيدروكسيل السلسلة الجانبية من SER ، Tyr أو Thr. خلال هذه العملية ، قم أولاً بإزالة سلسلة حماية السلسلة الجانبية بشكل انتقائي من الأحماض الأمينية المراد تصنيفها. بالنسبة إلى Tyr و Thr ، يمكن أن تتفاعل الأحماض الأمينية غير المحمية لسلاسلها الجانبية مباشرة. يمكن إزالة مجموعات حماية السلسلة الجانبية بشكل كمي في حالة 1 ٪ TFA/DCM. في هذه الطريقة ، يمكن توليد الوسيط النشط لفوسفوراميد Bis-benzyl و tetrazole بواسطة التفاعل مع الأخير ، ويمكن ربطه بمجموعة الهيدروكسيل. بعد ذلك ، يمكن تنفيذ تفاعل الأكسدة في ظل ظروف حمض البيروكسيد لإنشاء مجموعة الفسفونيل ، واستكمال الفسفرة.