الأكثر عرضة لفشل وحلول HPLC

كأداة عالية الدقة ، يمكن أن تؤدي HPLC بسهولة إلى بعض المشكلات الصغيرة المزعجة إذا لم يتم تشغيلها بالطريقة الصحيحة أثناء الاستخدام. واحدة من المشاكل الأكثر شيوعا هي مشكلة ضغط العمود. كيفية استكشاف الأخطاء وإصلاحها بسرعة الكروماتوجراف المعيب. يتكون نظام HPLC بشكل أساسي من زجاجة الخزان ومضخة وحاقن وعمود وغرفة درجة حرارة العمود وكاشف ونظام معالجة البيانات. بالنسبة للنظام بأكمله ، فإن الأعمدة والمضخات والكاشفات هي المكونات الرئيسية والمواقع الرئيسية المعرضة للمشاكل.

مفتاح ضغط العمود هو المنطقة التي تحتاج إلى عناية وثيقة عند استخدام HPLC. يرتبط استقرار ضغط العمود ارتباطًا وثيقًا بشكل ذروة الكروماتوغرافيا وكفاءة العمود وكفاءة الفصل ووقت الاحتفاظ به. لا يعني استقرار ضغط العمود أن قيمة الضغط مستقرة بقيمة مستقرة ، بل أن نطاق تقلبات الضغط يتراوح بين 345 كيلو باسكال أو 50psi (مما يسمح باستخدام شطف التدرج عندما يكون ضغط العمود مستقرًا ويتغير ببطء). ارتفاع الضغط أو منخفض جدًا هو مشكلة ضغط العمود.

الأكثر عرضة لفشل وحلول HPLC

1 ، الضغط العالي هو المشكلة الأكثر شيوعًا في استخدام HPLC. وهذا يعني ارتفاع مفاجئ في الضغط. بشكل عام ، هناك الأسباب التالية: (1) بشكل عام ، ويرجع ذلك إلى انسداد قناة التدفق. في هذه المرحلة ، يجب أن نفحصها. أ. أولاً ، قطع مدخل مضخة الفراغ. عند هذه النقطة ، تمتلئ أنبوب نظرة خاطفة بالسائل بحيث كان أنبوب نظرة خاطفة أصغر من زجاجة المذيبات لمعرفة ما إذا كان السائل يقطر عند الرغبة. إذا كان السائل لا يقطر أو يقطر ببطء ، يتم حظر رأس مرشح المذيبات. العلاج: نقع في حامض النيتريك بنسبة 30 ٪ لمدة نصف ساعة وشطفه بالماء الفائق. إذا كان القطرات السائلة بشكل عشوائي ، يكون رأس مرشح المذيبات طبيعيًا ويتم فحصه ؛ ب. افتح صمام التطهير بحيث لا تمر المرحلة المحمولة عبر العمود ، وإذا لم يتم تقليل الضغط بشكل كبير ، فسيتم حظر رأس المرشح الأبيض. العلاج: تمت إزالة الرؤوس البيضاء المصفاة و Sonicated مع 10 ٪ الأيزوبروبانول لمدة نصف ساعة. على افتراض أن الضغط ينخفض ​​إلى أقل من 100psi ، فإن الرأس الأبيض المصفى طبيعي ويتم فحصه ؛ ج. قم بإزالة نهاية الخروج من العمود ، إذا لم ينخفض ​​الضغط ، يتم حظر العمود. العلاج: إذا كان انسداد الملح العازلة ، شطف 95 ٪ حتى يصبح الضغط طبيعيًا. إذا كان الانسداد ناتجًا عن بعض المواد المحفوظة للغاية ، فيجب استخدام تدفق أقوى من المرحلة المحمولة الحالية للاندفاع نحو الضغط الطبيعي. إذا لم ينخفض ​​ضغط التنظيف على المدى الطويل وفقًا للطريقة أعلاه ، فيمكن اعتبار مدخل ومنفذ العمود متصلاً بالأداة على العكس ، ويمكن تنظيف العمود مع مرحلة الهاتف المحمول. في هذا الوقت ، إذا لم ينخفض ​​ضغط العمود ، فلا يمكن استبدال لوحة غربال مدخل العمود إلا ، ولكن بمجرد أن تكون العملية غير جيدة ، يكون من السهل أن تؤدي إلى تقليل تأثير العمود ، لذلك حاول استخدام أقل. للمشاكل الصعبة ، يمكن النظر في استبدال العمود.

(2) إعداد معدل التدفق غير الصحيح: يمكن إعادة تعيين معدل التدفق الصحيح.

(3) نسبة التدفق غير الصحيحة: يكون مؤشر اللزوجة ذات النسب المختلفة من التدفقات مختلفة ، كما أن ضغط النظام المقابل للتدفق مع ارتفاع اللزوجة أكبر أيضًا. إذا أمكن ، يمكن استبدال المذيبات اللزوجة المنخفضة أو إعادة تعيينها وإعدادها.

(4) انجراف ضغط النظام: اضبط الصفر من مستشعر المستوى السائل.

2 ، عادة ما يكون الضغط منخفضًا جدًا (1) بسبب تسرب النظام. ما يجب القيام به: ابحث عن كل اتصال ، وخاصة الواجهة في كلا طرفي العمود ، وتشديد منطقة التسرب. قم بإزالة المنشور وتشديد أو ربط فيلم PTFE بقوة مناسبة.

(2) يدخل الغاز المضخة ، لكن الضغط عادة ما يكون غير مستقر في هذا الوقت ، مرتفع ومنخفض. والأهم من ذلك ، لن تكون المضخة قادرة على امتصاص السائل. طريقة المعالجة: افتح صمام التنظيف وتنظيفه بمعدل تدفق قدره 3 ~ 5 مل/دقيقة. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فقد تم استنشاق فقاعات الهواء في صمام العادم باستخدام أنبوب إبرة مخصص.

(3) لا يوجد تدفق محمول: تحقق مما إذا كانت هناك مرحلة متنقلة في زجاجة الخزان ، وما إذا كان الحوض مغمورة في المرحلة المتنقلة ، وما إذا كانت المضخة تعمل.

(4) لم يتم إغلاق الصمام المرجعي: يتم إغلاق الصمام المرجعي بعد التباطؤ. عادة ما ينخفض ​​إلى 0.1. ~ 0.2 مل/ دقيقة بعد إغلاق الصمام المرجعي.

ملخص:

في هذه الورقة ، يتم تحليل المشكلات الشائعة فقط في اللوني السائل. بالطبع ، في تطبيقنا العملي ، سنواجه المزيد من المشكلات الأخرى. في معالجة الأخطاء ، يجب أن نتبع المبادئ التالية: فقط نغير عاملًا واحدًا في وقت واحد لتحديد العلاقة بين العامل الافتراضي والمشكلة ؛ بشكل عام ، عند استبدال قطع الغيار لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها ، يجب أن نولي اهتمامًا لوضع الأجزاء السليمة المعدلة في مكانها لمنع النفايات ؛ إن تشكيل عادة قياسية جيدة هو مفتاح نجاح معالجة الأخطاء. في الختام ، عند استخدام HPLC ، من المهم الانتباه إلى عينة من المعالجة والتشغيل والصيانة المناسبة للمعدات.