مشاكل وحلول تخليق الببتيد الطويل

في الأبحاث البيولوجية، عادة ما يتم استخدام عديدات الببتيد ذات التسلسل الطويل.بالنسبة للببتيدات التي تحتوي على أكثر من 60 حمضًا أمينيًا في التسلسل، يتم استخدام التعبير الجيني وSDS-PAGE بشكل عام للحصول عليها.ومع ذلك، تستغرق هذه الطريقة وقتًا طويلاً وتأثير فصل المنتج النهائي ليس جيدًا.

التحديات والحلول لتخليق الببتيد الطويل

في تخليق الببتيدات الطويلة، نواجه دائمًا مشكلة، وهي أن العائق الاستاتيكي لتفاعل التكثيف يزداد مع زيادة التسلسل في التوليف، ويجب تعديل وقت التفاعل لإكمال التفاعل.ومع ذلك، كلما زاد وقت التفاعل، تم إنتاج المزيد من الآثار الجانبية، ويتم تشكيل جزء من الببتيد المستهدف.مثل هذه المخلفات - سلاسل الببتيد الناقصة هي شوائب رئيسية يتم إنتاجها في تخليق الببتيد الطويل.لذلك، في تركيب الببتيد الطويل، المشكلة الرئيسية التي يجب علينا التغلب عليها هي استكشاف ظروف التفاعل وطرق التفاعل عالية الجودة، وذلك لجعل تفاعل تكثيف الأحماض الأمينية أكثر شمولاً واكتمالًا.بالإضافة إلى ذلك، قم بتقليل وقت التفاعل، لأنه كلما زاد وقت التفاعل، زادت التفاعلات الجانبية التي لا يمكن السيطرة عليها، وأصبحت المنتجات الثانوية أكثر تعقيدًا.ولذلك يمكن تلخيص النقاط الثلاث التالية:

يمكن استخدام تركيب الميكروويف: بالنسبة لبعض الأحماض الأمينية التي تتم مواجهتها في عملية التخليق والتي ليس من السهل دمجها، يمكن استخدام تخليق الميكروويف.هذه الطريقة لها نتائج ملحوظة، وتقلل بشكل كبير من زمن التفاعل، وتقلل من تكوين اثنين من المنتجات الثانوية الرئيسية.

يمكن استخدام طريقة تركيب الأجزاء: عندما يصعب تصنيع بعض الببتيدات بطرق التوليف الشائعة وليس من السهل تنقيتها، يمكننا اعتماد التكثيف الكامل لعدة أحماض أمينية في جزء معين من الببتيد إلى سلسلة الببتيد ككل.يمكن لهذه الطريقة أيضًا حل العديد من المشكلات في التوليف.

يمكن استخدام تخليق أسيل هيدرازيد: تخليق أسيل هيدرازيد من الببتيدات هو وسيلة لتوليف المرحلة الصلبة من الببتيد N-محطة Cys وC-التفاعل الانتقائي الكيميائي ببتيد هيدرازيد بين تشكيل روابط أميد لتحقيق طريقة الترابط الببتيد.استنادًا إلى موضع Cys في سلسلة الببتيد، تقسم هذه الطريقة سلسلة الببتيد بأكملها إلى تسلسلات متعددة وتوليفها على التوالي.وأخيرًا، يتم الحصول على الببتيد المستهدف من خلال تفاعل تكثيف الطور السائل.هذه الطريقة لا تقلل بشكل كبير من وقت تصنيع الببتيد الطويل فحسب، بل تزيد أيضًا من نقاء المنتج النهائي بشكل كبير.

تنقية الببتيد طويلة

خصوصية الببتيدات الطويلة تؤدي حتما إلى مكونات معقدة من الببتيدات الخام.لذلك، يعد أيضًا تحديًا تنقية الببتيدات الطويلة بواسطة HPLC.سلسلة الأميلويد من عملية تنقية البولي ببتيد، تستوعب الكثير من الخبرة وتستخدم بنجاح في تنقية الببتيد الطويل.من خلال اعتماد معدات جديدة، وخلط أنظمة تنقية متعددة، والفصل المتكرر وطرق الخبرة الأخرى، تم تحسين معدل نجاح تنقية الببتيد الطويل بشكل كبير.