مشاكل وحلول تخليق الببتيد الطويل

في البحوث البيولوجية ، عادة ما تستخدم polypeptides مع تسلسل طويل. بالنسبة للببتيدات التي تحتوي على أكثر من 60 من الأحماض الأمينية في التسلسل ، يتم استخدام التعبير الجيني و SDS-PAGE بشكل عام للحصول عليها. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة تستغرق وقتًا طويلاً وتأثير فصل المنتج النهائي ليس جيدًا.

التحديات والحلول لتوليف الببتيد الطويل

في تخليق الببتيدات الطويلة ، نواجه دائمًا مشكلة ، أي أن العائق الجامعي لتفاعل التكثيف يزداد مع زيادة التسلسل في التوليف ، ويجب ضبط وقت التفاعل لجعل التفاعل كاملًا. ومع ذلك ، كلما طال وقت التفاعل ، يتم إنتاج المزيد من الآثار الجانبية ، ويتم تشكيل جزء من الببتيد المستهدف. مثل هذه البقايا - سلاسل الببتيد الناقصة هي شوائب رئيسية تنتج في تخليق الببتيد الطويل. لذلك ، في تخليق الببتيد الطويل ، فإن المشكلة الرئيسية التي يجب أن نتغلب عليها هي استكشاف ظروف التفاعل عالية الجودة وطرق التفاعل ، وذلك لجعل تفاعل تكثيف الأحماض الأمينية أكثر شمولاً وكامل. بالإضافة إلى ذلك ، قلل من وقت التفاعل ، لأنه كلما أطول وقت التفاعل ، كلما كانت التفاعلات الجانبية التي لا يمكن السيطرة عليها أكثر تعقيدًا ، زادت المنتجات الثانوية. لذلك ، يتم تلخيص النقاط الثلاث التالية:

يمكن استخدام تخليق الميكروويف: بالنسبة لبعض الأحماض الأمينية التي تمت مواجهتها في عملية التوليف التي ليس من السهل دمجها ، يمكن استخدام تخليق الميكروويف. هذه الطريقة لها نتائج ملحوظة ، وتقلل إلى حد كبير من وقت التفاعل ، ويقلل من تكوين منتجين رئيسيين.

يمكن استخدام طريقة تخليق الشظايا: عندما يصعب تصنيع بعض الببتيدات من خلال طرق التوليف الشائعة وليس من السهل تنقيتها ، يمكننا تبني التكثيف الكامل للعديد من الأحماض الأمينية في شريحة معينة من الببتيد إلى سلسلة الببتيد ككل. يمكن أن تحل هذه الطريقة أيضًا العديد من المشكلات في التوليف.

يمكن استخدام تخليق الأسيل هيدرازيد: تخليق الأسيل هيدرية للببتيدات هو طريقة لتوليف الطور الصلب للببتيد Cys N-terminal وتفاعل الهيدرازيد الكيميائي للببتيد C-terminal بين تكوين روابط أميد لتحقيق طريقة الترابط الببتيد. استنادًا إلى موضع Cys في سلسلة الببتيد ، تقسم هذه الطريقة سلسلة الببتيد بأكملها إلى تسلسلات متعددة وتجمعها على التوالي. أخيرًا ، يتم الحصول على الببتيد المستهدف من خلال تفاعل تكثيف الطور السائل. هذه الطريقة لا تقلل بشكل كبير من وقت تخليق الببتيد الطويل ، ولكن أيضًا يزيد بشكل كبير من نقاء المنتج النهائي.

تطهير الببتيد الطويل

خصوصية الببتيدات الطويلة تؤدي حتما إلى مكونات معقدة من الببتيدات الخام. لذلك ، إنه أيضًا تحد لتنقية الببتيدات الطويلة بواسطة HPLC. سلسلة أميلويد من عملية تنقية الببتيد ، وتمتص الكثير من الخبرة واستخدمت بنجاح في تنقية الببتيد الطويل. من خلال تبني معدات جديدة ، وخلط أنظمة التنقية المتعددة ، والفصل المتكرر وطرق الخبرة الأخرى ، تم تحسين معدل نجاح تنقية الببتيد الطويل بشكل كبير.