تقنية الببتيد فريت

نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET)

نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET) هو عملية نقل طاقة غير إشعاعية يتم فيها نقل طاقة الحالة المثارة من الجهة المانحة إلى الحالة المثارة المستقبلة من خلال تفاعل الأزواج الكهربائية بين الجزيئات.لا تتضمن هذه العملية فوتونات، وبالتالي فهي غير إشعاعية.يتمتع هذا الاختبار بمزايا كونه سريعًا وحساسًا وبسيطًا.

يمكن أن تكون الصبغة المستخدمة في مقايسة الحنق متطابقة.ولكن في معظم التطبيقات، يتم استخدام أصباغ مختلفة بالفعل.باختصار، نقل طاقة الرنين المضيئة هو نقل زوج من ثنائيات القطب من المتبرع (الصبغة 1) إلى المستقبل (الصبغة 2) عندما تكون المجموعة المانحة متحمسة.بشكل عام، يتداخل طيف الانبعاث لمجموعة فلوروفور الجهة المانحة مع طيف الامتصاص لمجموعة المستقبل."عندما تكون المسافة بين الفلوروفورين مناسبة (10 - 100 أ)، يمكن ملاحظة نقل طاقة الفلوروفور من المتبرع إلى المستقبل."تعتمد طريقة نقل الطاقة على التركيب الكيميائي للمستقبل:

1. يتم تحويله إلى اهتزاز جزيئي، أي أن الضوء المضيء لنقل الطاقة يختفي.(المستقبل هو يطفئ الضوء)

2. يكون الانبعاث أكثر كثافة من المستقبل نفسه، مما يؤدي إلى انزياح أحمر في طيف التألق الثانوي.(المستقبلات هي بواعث مضيئة).

ترتبط المجموعة المانحة (EDANS) والجين المستقبل (DABCYL) بشكل موحد بالركيزة الطبيعية لبروتياز فيروس نقص المناعة البشرية، وعندما لا يتم فصل الركيزة، يمكن لـ DABCYL أن يطفئ EDANS ومن ثم يصبح غير قابل للاكتشاف للفلور.عند انقطاع الأنزيم البروتيني فيروس نقص المناعة البشرية-1، لم يعد يتم إخماد EDANS بواسطة DABCYL، ويمكن بعد ذلك اكتشاف EDANS luciferases.يمكن رصد توافر مثبطات الأنزيم البروتيني عن طريق التغيرات في شدة مضان EDANS.

الببتيدات FRET هي أدوات ملائمة لدراسة عدم خصوصية الببتيداز.وبما أنه يمكن مراقبة عملية التفاعل بشكل مستمر، فإنه يوفر طريقة ملائمة للكشف عن نشاط الإنزيم.يوفر اللمعان الناتج بعد التحلل المائي للروابط الببتيدية بواسطة المتبرع/المتقبل مقياسًا لنشاط الإنزيم عند تركيزات النانومولار.عندما يكون الببتيد FRET سليمًا، فإنه يُظهر اختفاء مفاجئ للوميض الداخلي، ولكن عندما ينكسر أي رابطة ببتيدية مقابلة للمانح/المستقبل، فإنه يطلق وميضًا يمكن اكتشافه بشكل مستمر ويمكن بعد ذلك قياس نشاط الإنزيم.