تقنية الببتيد الحنق

نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET)

نقل طاقة الرنين مضان (FRET) هو عملية نقل الطاقة غير الإرهالية التي يتم فيها نقل الطاقة المانحة للدولة إلى الحالة المتحمسة من خلال تفاعل الأزواج الكهربائي بين الجزيئات. هذه العملية لا تتضمن فوتونات وبالتالي فهي غير إكراهية. هذا الفحص لديه مزايا أن تكون سريعًا وحسسًا وبسيطًا.

يمكن أن تكون الصبغة المستخدمة في اختبار الحنق متطابقة. ولكن في معظم التطبيقات ، يتم استخدام الأصباغ المختلفة بالفعل. باختصار ، فإن نقل طاقة الرنين المضيئة هو نقل زوج من الأقطاب من المانح (الصبغة 1) إلى المتقبل (الصبغة 2) عندما تكون مجموعة المانحين متحمسين. بشكل عام ، يتداخل طيف انبعاث مجموعة Fluorophore المانح مع طيف الامتصاص لمجموعة المستقبلين. "عندما تكون المسافة بين الفلوروفينات المناسبة (10 - 100 أ) ، يمكن ملاحظة نقل طاقة الفلوروفور من المتبرع إلى المتقبلي". تعتمد طريقة نقل الطاقة على التركيب الكيميائي للمستقبل:

1. يتم تحويله إلى اهتزاز جزيئي ، أي أن الضوء المضيء لنقل الطاقة يختفي. (المستقبل هو مروي خفيف)

2. الانبعاثات أكثر كثافة من المستقبلات نفسها ، مما يؤدي إلى الانزياح الأحمر في طيف التألق الثانوي. " (المستقبلات هي بواعث مضيئة).

ترتبط مجموعة المانحين (EDANS) وجين المتقبل (DABCYL) بشكل موحد بالركيزة الطبيعية لبروتياز فيروس نقص المناعة البشرية ، وعندما لا يتم فصل الركيزة ، يمكن أن يكون dabcyl edans ثم تصبح غير قابلة للكتابة للفلور. عند فصل البروتياز فيروس العوز المناعي البشري ، لم يعد إدانس قد تم إخماده بواسطة Dabcyl ، ويمكن اكتشاف Edans Luciferases لاحقًا. يمكن مراقبة توفر مثبطات الأنزيم البروتيني من خلال التغييرات في شدة مضان Edans.

الببتيدات الحنق هي أدوات مريحة لدراسة غير محدد الببتيداز. نظرًا لأنه يمكن مراقبة عملية رد الفعل بشكل مستمر ، فإنها توفر طريقة مريحة للكشف عن نشاط الإنزيم. يوفر اللمعان الذي تم إنتاجه بعد التحلل المائي لروابط الببتيد من قبل المتبرع/المستقبِل مقياسًا لنشاط الإنزيم بتركيزات النانومولار. عندما يكون الببتيد الحنق سليمًا ، فإنه يظهر اختفاء مفاجئًا للفلاش الداخلي ، ولكن عندما يكون أي رابطة ببتيد مقابل فواصل المانح/المستقبِل ، فإنه يطلق وميضًا ، والذي يمكن اكتشافه بشكل مستمر ، ويمكن بعد ذلك تحديد نشاط الإنزيم.